材料与方法

　　2.1试验条件与材料

　　2.1.1 试验条件

　　该研究在北京林业大学花房外的空地中进行，挑选大小一致、整齐健壮的植株材料（同第二章），每种10株，于2005年5月10日栽种于花盆中，盆高30cm，上口径35cm，下口径30cm，培养土配比为1园土：1草炭：1沙子：1有机肥。在生长期间给予正常的管理，7月12日把每个品种分为两个处理，每种处理（对照）5盆重复样本，混合取样，每个指标测定3个重复。

　　2.1.2 实验材料

　　蛇莓（Duchesnea indica ）多年生草本，全株有柔毛；匍匐茎长。 3出复叶，基生叶的叶柄长6-10多厘米，茎生叶的叶柄长1-7厘米；小叶片菱状卵形或倒卵形，长1.5-4厘米，宽1-3毫米，两侧小叶片较小，基部偏斜，边缘有钝锯齿，两面散生柔毛或表面近于无毛；托叶卵状披针形，有时有缺刻状分裂。花黄色，单生叶腋，直径1-2厘米；副萼片顶端3-5齿裂，通常3齿裂；花瓣几与副萼片或萼片等长。聚合果近球形或长椭圆形，直径1－1.5厘米，暗红色，外包宿存萼片。花期4月，果期5月。

　　连钱草（Glechoma hederacea）多年生草本。茎细，方形，被细柔毛，下部匍匐，上部直立。叶对生，肾形至圆心形，长1.5～3cm，宽1.5～5.5cm，边缘有圆锯齿，两面有毛或近无毛，下面有腺点；叶柄长为叶片的1～2倍。轮伞花序腋生，每轮2～6花；苞片刺芒状；花萼钟状，长7～10mm，萼齿狭三角状披针形，顶端芒状，外面有毛和腺点；花冠2唇形，淡蓝色至紫色，长1.7～2.2cm，下唇具深色斑点，中裂片肾形；雄蕊4，药室叉开。小坚果长圆形，褐色。花期3～4月，果期4～6月。

　　匍枝委陵菜（Potentilla flagellaris）多分枝，匍匐茎发达，分节出相对着生不定根与不定芽，与土壤接触后迅速生长；掌状复叶，小叶5枚，菱状倒卵形，浅绿色，花单生，花瓣多5枚，黄色，花茎约2cm，着生于叶腋处；花期为3至11月。

　　匍枝毛茛（Ranunculus repens）多数草本,少数为小灌木或木质藤本。多数植物的主根早萎,由茎基部生出须状不定根。单叶或复叶,互生或基生,稀对生;叶脉掌状,稀羽状。聚伞花序或由聚伞花序组成各式花序,稀总状花序。

　　2.2试验方法

　　自然干旱处理和浇水处理，在试验前3d对所有植株进行连续浇水处理，使每盆土壤都处于饱和含水状态，之后对浇水处理的植株2－3d进行浇水，使其不受水分胁迫。胁迫期间外部条件与自然条件一致，当下雨时用透明塑料布进行遮挡，使其不受雨水影响。对蛇莓、连钱草、匍枝委陵菜于胁迫0、6、11、16、24、31、38d取样（蛇莓取样至第31d）。在预实验中发现匍枝毛茛的耐旱性与其他三种植物相比较弱，所能耐的胁迫周期短，因此取样的时间也不同，分别在胁迫第0、3、6、9、12、15、17d。取样时间为早上7点，取样方法为在每种处理5盆中选取生长健壮、无病虫害的成熟叶片，混合取样。测定指标包括土壤含水量、叶片相对含水量、细胞膜透性、丙二醛、可溶性糖、脯胺酸含量、光合色素的测定。

　　2.2.1相关生理指标测定方法

　　(1)膜相对透性（电导率）的测法：采取功能叶片，流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3次，滤     纸吸干，用手持打孔机打成直径0.3cm的小圆片，每个试管中放10片，3个重复。后在试管中注入15ml蒸馏水，用循环真空泵抽气3次，室温静置0.5h,测定电导值R；再将试管置入废水浴中煮沸20min,测定杀死对照电导值R0,计算膜相对透性（电导率）。

　　计算公式：R／R0×100﹪

　　(2)脯氨酸含量测定：采用酸性茚三酮法（李合生，2000）。选取植株成熟叶片0.2g，加入5ml质量分数为3﹪的磺基水杨酸溶液，研磨提取；匀浆液转让离心管中，沸水浴中浸提10min，冷却后以5000r／min离心10min；吸取上清液2ml，加入2ml冰乙酸和4ml酸性茚三酮显色液，于沸水浴中加热30min，冷却；加入5ml甲苯，充分振荡，静置分层后吸取上层红色甲苯层，以甲苯为对照，在520nm波长下比色，计算脯氨酸含量。样品的质量分数=X×V/W,X:通过标准曲线求出的2ml测定液中脯氨酸的浓度（ug/g）,V:提取液得总体积5ml,W:样品鲜重0.2g。

　　(3)丙二醛的测量：取叶片0.2g，加入少量石英砂，用6ml 5%三氯乙酸（TCA）冰浴研磨，4 ℃下5000r/min离心10分钟。取上清液2ml，加入2ml质量分数为0.67%得硫代巴比妥酸(TBA)，(对照为2ml蒸馏水+2mlTBA)混匀，在沸水浴上反应20分钟，迅速冷却后，取上清液测定其在450、532、600nm下的吸光值，按照公式MDA含量（umol/g）=[6.45×(A532-A600)-0.56×A450] ×V/W,同时也可计算出可溶性糖的含量（mmol/g）=11.74×A532×V/W。其中V为研磨液的体积6ml，W为样品鲜重0.2g。

　　(4)土壤含水量的测量：在同一处理的5个盆中各用打孔器钻取盆中10cm深的土壤，后于铝盒中混匀，三个重复，称鲜重；在80℃下烘干24小时，称干重。土壤含水量（%）=（W1-W2）/（W1-W）×100％。W1为土壤鲜重，W2为土壤干重，W为铝盒自重。

　　(5)叶片相对含水量（RWC）和水份饱和亏缺（WSD）的测定：采集后，用蒸馏水清洗叶片，滤纸吸干表面浮水，后将叶片剪成0.5cm2的小块，每个重复10片，三个重复，称取鲜重（Wf），放入小烧杯中吸水24h后称取饱和重（Wt），然后将叶片放入80℃烘箱24h后称 取干重（Wd）。RWC(％)＝（Wf-Wd）/（Wt－Wd）×100％,WSD(％)= （Wt-Wf）/（Wt－Wd） ×100％。